Avaliação do papel da hipermucoviscosidade na patogenicidade de uma linhagem de Klebsiella pneumoniae K64 XDR causadora de bacteremia
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2020.
| Main Author: | Sousa, Isabela Felix Alencar de |
|---|---|
| Other Authors: | Martins, Vicente de Paulo |
| Format: | Dissertação |
| Language: | Português |
| Published: |
2020
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| Subjects: | |
| Online Access: |
https://repositorio.unb.br/handle/10482/38880 |
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ir-10482-388802020-07-03T12:49:55Z Avaliação do papel da hipermucoviscosidade na patogenicidade de uma linhagem de Klebsiella pneumoniae K64 XDR causadora de bacteremia Sousa, Isabela Felix Alencar de Martins, Vicente de Paulo Campos, Tatiana Amabile de Klebsiella pneumoniae Patogenicidade Hipervirulência Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2020. Klebsiella pneumoniae é uma bactéria Gram-negativa encapsulada que normalmente afeta pacientes imunocomprometidos. Na década de 1980, uma nova variante foi descoberta e chamada de hipervirulenta (hvKP). Esta é caracterizada por causar abscessos hepáticos em pessoas consideradas saudáveis, além de poderem se espalhar metastaticamente e de apresentarem o fenótipo de hipermucoviscosidade (hmv). Este pode ocorrer devido à expressão dos reguladores rmpA e/ou rmpA2, e é detectado por um string test positivo. Uma linhagem de K. pneumoniae (Kp 34) isolada de um paciente com bacteremia em Brasília apresentou extensiva resistência à antibióticos (XDR) e alta virulência, apesar de ser considerada atípica por não apresentar sorotipo capsular K1 ou K2 e não possuir os genes rmpA e rmpA2. O foco deste trabalho foi avaliar o papel da hipermucoviscosidade na patogênese de Kp 34 através de mutagênese com o transposon TnPhoA. 100 mutantes foram obtidos e analisados em relação à presença do fenótipo hmv, aqueles não hipermucoviscosos foram selecionados e avaliados com relação à sua curva de crescimento, presença de cápsula, produção de biofilme, sobrevivência em sangue e soro humanos, sobrevivência em células HEp-2 e citotoxicidade, indução da produção de NO e de PPAR-γ por essas células. Além disso, AP-PCRs seguidas de sequenciamento foram realizadas para identificar os possíveis genes interrompidos durante a mutagênese. Os resultados nos mostraram que a perda do fenótipo hmv afetou a capacidade dos mutantes em produzir biofilme e em sobreviver em sangue humano. Assim como afetou a capacidade de células HEp-2 infectadas de induzir a produção de NO. Porém, o fenótipo hmv não aparenta ser crucial na interação dessa linhagem com células epiteliais, pois os mutantes foram capazes de sobreviver mais no interior dessas células, além de serem mais citotóxicos do que Kp 34. Genes relacionados ao transporte de sideróforos e de ferro, transportadores ABC, sistemas de efluxo, proteínas ligadoras de ATP, sistema de secreção do tipo II e L-Fucose isomerase podem ter sido interrompidos durante a mutagênese, afetando assim a expressão do fenótipo de hipermucoviscosidade. CNPq Klebsiella pneumoniae is an encapsulated Gram-negative bacteria that can normally cause infections in immunocompromised patients. By the 1980s, a new variant called hypervirulent was discovered. This strain is able to cause liver abscesses in healthy individuals, is capable of metastatic spread and normally presents a hypermucoviscous phenotype (hmv). The hmv phenotype generally occurs due to the expression of the regulators rmpA and/or rmpA2 and is detected by a positive string test. A strain of K. pneumoniae (Kp 34) was isolated from a patient with bacteremia in Brasilia and presented extensive resistance to antibiotics (XDR) and high virulence. However, it was considered atypical because it didn’t present capsular serotype K1 or K2, nor the rmpA rmpA2 genes. The focus of this work was to evaluate the role of hypermucoviscosity in the pathogenesis of Kp 34 using transposon mutagenesis. A hundred mutants were obtained and analyzed in regard of the presence of hmv phenotype. Those hmv- (not hypermucoviscous) were selected and tested in regard of their growth curves, presence of capsule, biofilm production, survival in human blood and serum, survival inside HEp-2 cells and cytotoxicity, production of NO and PPAR-γ by HEp-2 cells. In addition, AP-PCRs followed by DNA sequencing were performed to identify the possible interrupted genes during mutagenesis. The results showed that the loss of the hmv phenotype impacted in the ability of the mutants to produce biofilm and to survive in human blood. In addition, it affected the ability of infected HEp-2 cells to produce NO. On the other hand, this phenotype does not seem to be crucial for the interaction of this strain with HEp-2 cells, because the mutants were able to survive better inside those cells and they were also more cytotoxic to those cells than Kp 34. Genes related to the transport of siderophores and iron, ABC transporters, efflux systems, ATP binding-proteins, type II secretion systems and LFucose isomerase could have been interrupted and impacted in the expression of hmv phenotype. 2020-07-03T12:49:55Z 2020-07-03T12:49:55Z 2020-02-18 Dissertação SOUSA, Isabela Felix Alencar de. Avaliação do papel da hipermucoviscosidade na patogenicidade de uma linhagem de Klebsiella pneumoniae K64 XDR causadora de bacteremia. 2020. 136 f. il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020. https://repositorio.unb.br/handle/10482/38880 Português Acesso Aberto A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data. application/pdf |
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