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Genotipificação de Staphylococcus aureus isolados de queijo minas frescal e leite de bovinos com mastite subclínica

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2020.

Main Author: Poll, Paula Suzana Elisa Maciel
Other Authors: Borges, José Renato Junqueira
Format: Tese
Language: Português
Published: 2020
Subjects:
Microbiologia de alimentos
Segurança alimentar
Derivados do leite
Patógenos alimentares
Doenças transmitidas por alimentos
Staphylococcus aureus
Online Access: https://repositorio.unb.br/handle/10482/39053
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id ir-10482-39053
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spelling ir-10482-390532020-07-06T15:17:09Z Genotipificação de Staphylococcus aureus isolados de queijo minas frescal e leite de bovinos com mastite subclínica Poll, Paula Suzana Elisa Maciel Borges, José Renato Junqueira Microbiologia de alimentos Segurança alimentar Derivados do leite Patógenos alimentares Doenças transmitidas por alimentos Staphylococcus aureus Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2020. Espécies do gênero Staphylococcus são bactérias oportunista presentes na microbiota normal de mamíferos e causa mastite bovina. Representa na área de qualidade de alimentos um risco a saúde pública por estar envolvido em surtos de intoxicação alimentar, pela presença dos genes de enterotoxinas e resistência aos antimicrobianos. O objetivo deste trabalho foi genotipificar Staphylococcus aureus oriundos do leite de vacas com mastite subclínica e queijo do tipo minas frescal fracionado, obtidas na região do Distrito Federal, Brasil. As amostras de queijo foram isoladas em Baird Parker, em seguida, colônias selecionadas foram identificadas a partir dos testes bioquímicos. Cepas caracterizadas como Staphylococcus coagulase positiva seguiram para análise molecular e antibiograma. As amostras de S. aureus do leite mastítico utilizadas foram do banco de germoplasma do laboratório de microbiologia clínica veterinária da UNB. Após extração do DNA total, foi executada a PCR com primers: espécie-específico AroA, enterotoxinas SEA, SEC e SEE, e resistência MecA. Dentre o grupo amostral de 134 queijos coletados, 54 amostras foram detectadas a presença de Staphylococcus coagulase positivas, e após PCR do gene AroA espécie específico foram identificados 38 S. aureus. Das estirpes do leite mastítico bovino foram caracterizados 55 S. aureus. A eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) foi realizada em 21 linhagens selecionadas aleatoriamente, sendo 18/38 de linhagens do queijo e 3/55 da linhagem do leite mastítico. Todas as cepas foram positivas para os genes AroA e CoA (93). Foi detectada a predominância do gene COA de 600pb nas linhagens oriundas do leite (33/55) e do queijo (16/38). Observou-se a presença de enterotoxina estafilocócica em 16 (SEA), 4 (SEC) e 16 (SEE) isolados de S. aureus no leite; e 6 (SEA), 2 (SEC) e 2 (SEE) em isolados de queijo. Dentre os queijos avaliados foi encontrado um predomínio de cepas enterotoxigênicas na região Guará (Central Adjacente) (4/10) e no ponto de venda informal (7/10). Um isolado de S. aureus do estudo foi identificado o gene MecA (MRSA), originária do queijo de São Sebastião (Leste) comercializado em uma casa de frios. Trinta e seis (36/38) S.aureus isolados do queijo apresentaram resistência a droga ceftazidima. Na análise PFGE, foram detectados 19 perfis, todas com similaridade genotípica acima de 70%. Foram encontrados 2 clones, um entre cepas originária do leite e queijo e outro do queijo de diferentes regiões. A correspondência genotípica analisada entre as linhagens estudadas sugere contaminação de origem animal, e a manutenção das mesmas linhagens através da cadeia produtiva a partir da matéria-prima. Este resultado implica provável falha de pasteurização e manuseio no processo produtivo, reforçando a necessidade de melhores medidas de controle de higiene alimentar. Staphylococcus genus species are opportunistic bacteria present in the normal mammalian microbiota and may cause bovine mastitis. In the area of food quality, it represents a public health risk since it is involved in outbreaks of food poisoning due to the presence of enterotoxin genes and antimicrobials resistance. The aim of this work was to genotype Staphylococcus aureus from cow milk with subclinical mastitis and fractional Minas fresh cheese, obtained in the Federal District, Brazil. The cheese samples were isolated in Baird Parker from which selected colonies were identified by biochemical tests. Strains characterized as coagulase positive Staphylococcus were then evaluated by both molecular analysis and antibiogram. The S. aureus samples from mastitic milk used were from the germplasm bank of the UNB veterinary clinical microbiology laboratory. After total DNA extraction, PCR was performed with the following primers: species-specific AroA, enterotoxins SEA, SEC and SEE, and MecA resistance. Within the sample group where 134 cheeses were collected, 54 samples were detected with the presence of coagulase positive Staphylococcus, and after PCR of the specific species AroA gene 38 S. aureus were identified. 55 S. aureus were characterized from bovine mastitic milk strains. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) was performed on 21 strains randomly selected: 18/38 of the cheese and 3/55 of the mastitic milk. All strains were positive for AroA and CoA genes (93). The predominance of the 600bp COA gene amplicon was detected from milk (33/55) and cheese strains (16/38). Staphylococcal enterotoxin was observed in 16 (SEA), 4 (SEC) and 16 (SEE) S. aureus isolates in milk; and 6 (SEA), 2 (SEC) and 2 (SEE) isolates in cheese. Among the evaluated cheeses, a predominance of enterotoxigenic strains was found in the Guará region (Central Adjacent) (4/10) and at the informal point of sale (7/10). A S. aureus isolate from the study was identified with the MecA gene (MRSA), originating from São Sebastião cheese (East) sold in a cheese shop. Thirty-six (36/38) S.aureus isolates in cheese showed ceftazidime drug resistance. In the PFGE analysis, 19 profiles were detected, all with genotypic similarity above 70%. Two clones were found, one between strains originating from milk and cheese, and the other from cheese, from different regions. The analyzed genotypic correspondence between the studied strains suggests animal origin contamination and the maintenance of the same strains through the production chain from the raw material. These results implies a probable failure during production process regarding the pasteurization and handling, reinforcing the need for better measures of food hygiene control. 2020-07-06T15:17:09Z 2020-07-06T15:17:09Z 2020-07-06 2020-02-17 Tese POLL, Paula Suzana Elisa Maciel. Genotipificação de Staphylococcus aureus isolados de queijo minas frescal e leite de bovinos com mastite subclínica. 2020. viii, 99 f. Tese (Doutorado em Saúde Animal)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020. https://repositorio.unb.br/handle/10482/39053 Português Acesso Aberto A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data. application/pdf
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