Caracterização morfológica e bioquímica da Fibrina C leucoplaquetária autóloga : perspectivas na aplicação clínica
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2020.
| Main Author: | Oliveira, Leonel Alves de |
|---|---|
| Other Authors: | Kuckelhaus, Selma Aparecida Souza |
| Format: | Tese |
| Language: | Português |
| Published: |
2020
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| Subjects: | |
| Online Access: |
https://repositorio.unb.br/handle/10482/39815 |
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ir-10482-398152020-12-29T15:25:49Z Caracterização morfológica e bioquímica da Fibrina C leucoplaquetária autóloga : perspectivas na aplicação clínica Oliveira, Leonel Alves de Kuckelhaus, Selma Aparecida Souza profleonel Fibrina Centrifugação Concentrados sanguíneos Ultraestrutura Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2020. Os concentrados sanguíneos (CS), tanto a forma líquida anticoagulada de plasma rico em plaquetas (PRP) como a forma polimérica de fibrina rica em plaquetas (PRF) são preparações terapêuticas autólogas não-transfusionais com propriedades biológicas aplicáveis na regeneração tecidual. Esses CS diferem na forma de preparo, na arquitetura da rede de fibrina, na liberação dos fatores de crescimento e no conteúdo de plaquetas e células. Considerando que as alterações metodológicas podem resultar em matrizes distintas e possíveis comprometimentos de sua eficácia clínica, este trabalho avaliou a influência de variações na força g, tempo de rotação, ângulo do rotor e tipos de tubos sobre o conteúdo celular, organização morfológica, tempo de fibrinólise e liberação do vascular endotelial growth fator (VEGF) em matrizes sanguíneas experimentais. Amostras de sangue humano foram utilizadas para obter matrizes experimentais de PRF e plasma sanguíneo em três modelos de centrífugas com distintos rotores de ângulo 80-2B (45o), EBA200 (33o) e FibrinFuge25 (25o); três forças g (200, 400 e 800 por 10 minutos); três tipos de tubos (tubos de plasma EDTA, vidro puro e plástico com SiO2). A contagem de células e plaquetas foi realizada por citometria de fluxo, utilizando um contador hematológico automático; As análises morfológicas dos espécimes experimentais de PRF foram realizadas por macroscopia (MA), microscopia óptica (LM), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM). A análise de VEGF foi realizada por Cytometric Bead Array (CBA), um imunoensaio quantitativo. Os resultados da contagem de plaquetas em amostras experimentais de plasma mostraram que as maiores concentrações na fração sobrenadante foram obtidas com 200 x g e com forças de 400 a 800 x g somente na zona de buffy coat. A análise macroscópica das matrizes de PRF apresentou membranas maiores e aumento da área de buffy coat com a utilização do ângulo reduzido. A análise por microscopia de luz apresentou um conteúdo mais dispersivo de plaquetas no corpo das matrizes com a redução do ângulo do rotor combinado à baixa força de g, bem como diferenças no aumento das concentrações de plaquetas no buffy coat (800 xg) e no corpo da matriz (200 xg). A análise por microscopia eletrônica de varredura reafirmou os achados da microscopia óptica a partir de cortes transversais do coágulo de PRF. Os aumentos de 20 a 40.000x esclareceram a ultraestrutura tridimensional da matriz de PRF, durante a fibrinólise, permitiu a visualização de fragmentos de óxido de silício utilizados como ativador de coágulo em tubos de plástico e a presença de eritrócitos poliédricos na porção terminal da PRF. As maiores concentrações de VEGF foram observadas nas matrizes obtidas em tubos de vidro submetidos às menores faixas de força g. Os resultados desse estudo elucidaram a estrutura da matriz de fibrina, a dispersão dos elementos figurados do sangue ao longo da matriz e a variação morfológica sofrida pela fibrina durante o processo de fibrinólise, e no conjunto, esses resultados contribuirão para o entendimento dos efeitos dos diferentes parâmetros na forma e nos elementos que compõem a matriz de PRF. Blood Concentrates (BC) such as Platelet Rich Plasma (PRP) liquid anticoagulated form and Platelet Rich Fibrin (PRF) polymeric form are autologous non-transfusional therapeutical preparations with biological properties applied to tissue regeneration. These BC differ in the way of preparation in fibrin network architecture, growth factors release as well in platelet/cells content. Although, methodological changes can result in distinct matrix that can compromise their clinical effectiveness. This work evaluated the influence of variations in g force, spin time, rotor angle and tubes type in platelet/cells content, morphological organization, time of fibrinolysis, vascular endothelial growth factor (VEGF) release, in experimental blood matrices. Blood samples were used to obtain experimental PRF matrices and blood plasma in three centrifuges models with distinct rotors angle 80-2B (45o), EBA200 (33o) and FibrinFuge25 (25o); three g forces (200, 400, and 800 during 10 minutes); three tubes type (EDTA plasma tubes, pure glass and plastic with SiO2). Cell and platelets count were flow cytometry performed using an automatic hematology counter; to morphologic analysis of PRF experimental specimens were performed by macroscopic (MA), light microscopy (LM), scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM). For VEGF release a quantitative immunoassay by Cytometric Bead Array (CBA). The platelets count in experimental plasma specimens showed highest concentrations of platelets in supernatant fraction with 200 xg and with 400-800 xg ratio only in buffy coat zone. Macroscopic analysis of PRF matrices showed larger membranes and increase in buffy coat area with reduced angle. LM analysis show more dispersive platelet content with rotor angle reduction and low g force combination in matrices body, as well differences in increase platelet concentrations in buffy coat (800g) and matrix body (200g). SEM analysis reaffirmed the last findings in MO with cross sectional of PRF clot and with increases of 20 to 40,000x enlighten many particularities about the 3D structure of the PRF matrix, fibrinolysis, contamination with fragments of silicon oxide used as a clot activator in plastic tubes and presence of polyhedral erythrocytes in terminal portion of PRF. The results of this study elucidated the structure of the fibrin matrix, the dispersion of the cells and platelets throughout the matrix and the morphological variation suffered by fibrin during the fibrinolysis process, and as a whole, these results will contribute to understand the effects of different parameters in the morphology and components of the PRF matrix. 2020-12-29T15:25:49Z 2020-12-29T15:25:49Z 2020-12-29 2020-07-31 Tese OLIVEIRA, Leonel Alves de. Caracterização morfológica e bioquímica da Fibrina C leucoplaquetária autóloga: perspectivas na aplicação clínica. 2020. 221 f., il. Tese (Doutorado em Ciências Médicas)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020. https://repositorio.unb.br/handle/10482/39815 Português Acesso Aberto A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data. application/pdf |
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