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Effects of long cooling periods of the ear skin on the isolation and cultivation of bovine fibroblasts for use in nuclear transfer technique

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2020.

Main Author: Araújo, Jessica Maresch de
Other Authors: Oliveira, Rodrigo Arruda de
Format: Dissertação
Language: Inglês
Published: 2021
Subjects:
Clonagem
Refrigeração de amostras
Reprogramação celular
Transporte de animais
Viabilidade celular
Online Access: https://repositorio.unb.br/handle/10482/41101
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id ir-10482-41101
recordtype dspace
spelling ir-10482-411012021-06-07T17:01:02Z Effects of long cooling periods of the ear skin on the isolation and cultivation of bovine fibroblasts for use in nuclear transfer technique Araújo, Jessica Maresch de Oliveira, Rodrigo Arruda de jessica.maresch.vet@gmail.com Clonagem Refrigeração de amostras Reprogramação celular Transporte de animais Viabilidade celular Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2020. O armazenamento e transporte de amostras de animais que vieram a óbito ou estão localizados em fazendas distantes de laboratórios por longos períodos de tempo constitui uma realidade. A necessidade de um protocolo eficiente de armazenamento e transporte destas amostras para a manutenção da viabilidade tecidual do animal de interesse existe, e para tal, as orelhas de oito fêmeas bovinas foram coletadas no momento do óbito, lavadas, tricotomizadas e armazenadas por 30 dias a 5oC. Nos dias 0, 2, 4, 7, 14, 21 e 30, o cultivo de explantes de pele foi realizado. Em comparação aos diferentes períodos de refrigeração, o tempo para o aparecimento das primeiras células ao redor dos explantes, tempo até confluência, concentração celular no momento do congelamento, taxa de contaminação e viabilidade celular foram observados. Um aumento no tempo de aparecimento dos primeiros fibroblastos foi observado com o aumento do tempo de refrigeração, onde no dia 0, as células levaram 4±0 para aparecer ao redor dos explantes enquanto no dia 30, elas cresceram apenas com 33.5±1.5 dias. Um aumento também ocorreu no tempo até confluência celular com períodos de refrigeração mais longos. Células do dia 0 levaram 24±2 dias para atingir confluência enquanto células do dia 30 atingiram confluência com 31±0 dias. Contaminação foi mais prevalente em períodos posteriores (14, 21 e 30) e a concentração celular caiu drasticamente com o aumento do período de resfriamento, caindo de 1.334.375±131.375cel/mL no dia 0 para 311.250±0cell/mL no dia 30. De igual maneira, a viabilidade celular diminuiu de 85,6±1,7% no dia 0 para apenas 28,72±4,81% no dia 30. Quando células refrigeradas a 5°C por 30 dias foram utilizadas como doadoras de núcleo a técnica de transferência nuclear, uma taxa de blastocisto de 26.05% em D7 foi obtida, uma boa taxa de blastocisto para um longo períodos de refrigeração. Foi observado que a refrigeração de tecido viabiliza a cultura celular para transferência nuclear por longos períodos de refrigeração de amostra. No entanto, o aumento no tempo de armazenamento acarreta danos celulares, dificultando o cultivo, diminuindo consideravelmente a viabilidade celular pós- descongelamento e a concentração celular, mas mantendo a capacidade celular como doadora de núcleo para a produção de embriões clones. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Storage and transportation for long periods of time of samples from animals that died or are housed in properties located far away from laboratories is a reality. The need for an efficient protocol of storage and transportation of such samples for maintenance of the animal of interest’s tissue viability exists, and for such, ears of eight bovine females were collected on the moment of death, washed, trichotomized and stored for 30 days at 5oC. On days 0, 2, 4, 7, 14, 21 and 30, skin explant culture was performed. In comparison between the different time points, the time for the first fibroblasts to outgrow skin explants, time to confluence, cell concentration on freezing moment, contamination rates and cell viability were observed. An increase in fibroblast outgrowth time was observed with increased storage time, where on day 0, cells took 4±0 days in order to outgrow explants while on day 30, they outgrew with 33.5±1.5 days. An increase also occurred on time to confluence with longer refrigeration periods. Cells from day 0 reached confluence in 24±2 days while day 30 cells took 31±0 days in order to reach confluence. Contamination was more prevalent in posterior periods (14, 21 and 30 days) and cell concentration dropped drastically with increased storage time, reducing from 1.334.375±131.375cell/mL on day 0 to 311.250±0cell/mL on day 30. Likewise, cell viability was reduced with increased time, dropping from 85.6±1.7% on day 0 to only 28.72±4.81% on day 30. When cells cooled at 5°C for 30 days were used as nuclei donors in nuclear transfer technique, a blastocyst rate of 26.05% at D7 was obtained, a good embryonic development rate for a long period of storage. It was found that tissue refrigeration enables viable cell culture for nuclear transfer use for long periods of sample cooling. However, increase in sample storage time brings cell damage, making cultivation more difficult, lowering considerably cell viability post thawing and cell concentration, but maintaining cell capacity as nuclei donor for cloned embryo production. 2021-06-07T17:01:01Z 2021-06-07T17:01:01Z 2021-06-07 2020-11-16 Dissertação ARAÚJO, Jessica Maresch de. Effects of long cooling periods of the ear skin on the isolation and cultivation of bovine fibroblasts for use in nuclear transfer technique. Brasíl. 2020. 39 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Animais)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020. https://repositorio.unb.br/handle/10482/41101 Inglês Acesso Aberto A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data. application/pdf
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