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Atividade antibacteriana, citotóxica e imunomodulatória de Conocarpus erectus Linneus (Combretaceae)

Introdução: Os manguezais são áreas ricas em recursos economicamente importantes explorados pela população costeira humana. Conocarpus erectus (Combretaceae) é uma das espécies encontradas nos manguezais e é usada na medicina popular no tratamento de anemia, expectoração, conjuntivite, diabetes, dia...

Full description

Main Author: NASCIMENTO, Dayane Kelly Dias do
Other Authors: VIEIRA, Jeymesson Raphael Cardoso
Format: masterThesis
Language: por
Published: Universidade Federal de Pernambuco 2019
Subjects:
Combretaceae
Fitoterapia
Antibacteriano
Citotoxicidade
Fatores Imunológicos
Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/29689
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spelling ir-123456789-296892019-10-26T02:21:30Z Atividade antibacteriana, citotóxica e imunomodulatória de Conocarpus erectus Linneus (Combretaceae) NASCIMENTO, Dayane Kelly Dias do VIEIRA, Jeymesson Raphael Cardoso MELO, Cristiane Moutinho Lagos de http://lattes.cnpq.br/2781607895823992 http://lattes.cnpq.br/6727125662817949 Combretaceae Fitoterapia Antibacteriano Citotoxicidade Fatores Imunológicos Introdução: Os manguezais são áreas ricas em recursos economicamente importantes explorados pela população costeira humana. Conocarpus erectus (Combretaceae) é uma das espécies encontradas nos manguezais e é usada na medicina popular no tratamento de anemia, expectoração, conjuntivite, diabetes, diarréia, febre, gonorréia, dor de cabeça, hemorragia, orquítes, erupção cutânea e sífilis. Este estudo teve como objetivo investigar a atividade antibacteriana do extrato aquoso de folhas de C. erectus (EAFCe) em bactérias Gram-positivas e negativas multiresistentes e isoladas de feridas e atividades citotóxica e imunomodulatória em células humanas estimuladas com EAFCe. Métodos: Trata-se de um estudo pré-clínico desenvolvido no período de março de 2015 a janeiro de 2017. O material botânico foi coletado no Mangue da cidade de Itamaracá, distrito de Vila Velha no estado de Pernambuco – Brasil autorizado pela Empresa Pernambucana de Controle de Poluição Ambiental e Administração de Recursos Hídricos (CA DFRB N. 120/2014º). O extrato foi feito por infusão com água destilada, à 40ºC por 30 minutos e caracterizado através da análise qualitativa em Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e Cromatografia Liquida de Alta Eficiência (CLAE). Os ensaios contra as bactérias Gram-positivas e negativas foram realizados analisando a difusão em disco e os parâmetros de Concentração Mínima Inibitória (CMI) e Concentração Mínima Bactericida (CMB). As células mononucleares de sangue periférico humano foram obtidas a partir de 4 mL de sangue de 6 voluntários que assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido com a autorização do Comitê de ética em pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE, Brasil nº 1.870.360/2016). A análise de viabilidade celular foi realizada pelo teste de anexina V-FITC e coloração com iodeto de propídio em concentração de EAFCe de 50, 25, 12,5 e 6 μg / mL. A medição dos níveis de citocinas e quimiocinas nos sobrenadantes dos linfócitos foi realizada pelo Cytometric Beads Matrix System (CBA), análise in vitro de óxido nítrico, contagem total de linfócitos e avaliação da ativação e inibição de linfócitos também para o perfil imunológico. Resultados: O EAFCe apresentou 3’,4’-OH flavonóide, fenilpropanoglicosídeos, saponinas, proantocianidinas poliméricas e taninos hidrolisáveis em sua composição, além de dezoito compostos desconhecidos quando comparados aos padrões disponíveis. O EAFCe apresentou atividade antimicrobiana principalmente para a bactéria Gram-positiva S. aureus. A EAFCe não promoveu morte celular em 95% dos linfócitos humanos. IL-2, IL-10, TNF-α, citocinas de IFN-γ e óxido nítrico foram produzidos pelos linfócitos e o subconjunto de linfócitos T CD8 + foram ativados através da estimulação com EAFCe. Conclusão: EAFCe apresentou atividade antibacteriana moderada de acordo com os níveis do valor da CMI, não apresentou atividade citotóxica e mostrou atividade imunomoduladora em glóbulos brancos humanos, confirmando seu potencial uso como imunomodulador e antibacteriano, sugerindo potencial terapêutico alternativo desta planta para tratamento seguro e eficaz de feridas. CAPES Introduction: Mangroves are areas rich in economically important resources exploited by the human coastal population. Conocarpus erectus (Combretaceae) is one of the species found in mangroves and is used in folk medicine in the treatment of anemia, sputum, conjunctivitis, diabetes, diarrhea, fever, gonorrhea, headache, hemorrhage, orchitis, rash and syphilis. This study aimed to investigate antibacterial activity of aqueous extract of leaves of C. erectus (AELCe) in Gram-positive and negative multiresistent bacteria isolated from wounds and cytotoxic and immunomodulatory activities on human cells stimulated by AELCe. Methods: This is a pre-clinical study developed from March 2015 to January 2017. The botanical material was collected in the Mangrove of the city of Itamaracá, Vila Velha district of the state of Pernambuco - Brazil authorized by the Empresa Pernambucana de Controle de Poluição Ambiental e Administração de Recursos Hídricos (CA DFRB N. 120 / 2014). The extract was made by infusion with distilled water, at 40ºC for 30 minutes and characterized by qualitative analysis in thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). Gram-positive and negative bacteria assays were promoted by analyzing the disk diffusion and Minimum inhibitory Concentration (MIC) and minimum bactericidal Concentration (MBC) parameters. Human peripheral blood mononuclear cells were obtained from 4mL of blood from 6 volunteers who signed the Free and Informed Consent Form with the authorization of the Research Ethics Committee of the Universidade Federal de Pernambuco (UFPE, Brazil # 1,870,360 / 2016). Cell viability analysis was performed by the annexin V-FITC test and staining with propidium iodide at EAFC concentration of 50, 25, 12.5 and 6 μg / mL. Measurement of cytokine and chemokine levels in lymphocyte supernatants was performed by the Cytometric Beads Matrix System (CBA), in vitro nitric oxide analysis, total lymphocyte counts and evaluation of lymphocyte activation and inhibition also for the immunological profile. Results: AELCe presented 3 ', 4'-OH flavonoid, phenylpropanoglycosides, saponins, polymeric proanthocyanidins and hydrolyzable tannins in its composition, as well as eighteen unknown compounds when compared to the available standards. AELCe showed antimicrobial activity mainly for gram-positive S. aureus. AELCe did not promote cell death in 95% of human lymphocytes. IL-2, IL-10, TNF-α, IFN-γ cytokines and nitric oxide were produced by lymphocytes and the subset of CD8 + T lymphocytes were activated through stimulation with AELCe. Conclusion: AELCe showed moderate antibacterial activity according to MIC levels, did not show cytotoxic activity and presented immunomodulatory activity in human white blood cells, confirming its potential use as an immunomodulator and antibacterial, suggesting an alternative therapeutic potential of this plant for the safe and effective treatment of wounds. 2019-03-13T21:22:09Z 2019-03-13T21:22:09Z 2017-02-23 masterThesis https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/29689 por openAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ application/pdf Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Ciencias da Saude
institution REPOSITORIO UFPE
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Atividade antibacteriana, citotóxica e imunomodulatória de Conocarpus erectus Linneus (Combretaceae)
description Introdução: Os manguezais são áreas ricas em recursos economicamente importantes explorados pela população costeira humana. Conocarpus erectus (Combretaceae) é uma das espécies encontradas nos manguezais e é usada na medicina popular no tratamento de anemia, expectoração, conjuntivite, diabetes, diarréia, febre, gonorréia, dor de cabeça, hemorragia, orquítes, erupção cutânea e sífilis. Este estudo teve como objetivo investigar a atividade antibacteriana do extrato aquoso de folhas de C. erectus (EAFCe) em bactérias Gram-positivas e negativas multiresistentes e isoladas de feridas e atividades citotóxica e imunomodulatória em células humanas estimuladas com EAFCe. Métodos: Trata-se de um estudo pré-clínico desenvolvido no período de março de 2015 a janeiro de 2017. O material botânico foi coletado no Mangue da cidade de Itamaracá, distrito de Vila Velha no estado de Pernambuco – Brasil autorizado pela Empresa Pernambucana de Controle de Poluição Ambiental e Administração de Recursos Hídricos (CA DFRB N. 120/2014º). O extrato foi feito por infusão com água destilada, à 40ºC por 30 minutos e caracterizado através da análise qualitativa em Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e Cromatografia Liquida de Alta Eficiência (CLAE). Os ensaios contra as bactérias Gram-positivas e negativas foram realizados analisando a difusão em disco e os parâmetros de Concentração Mínima Inibitória (CMI) e Concentração Mínima Bactericida (CMB). As células mononucleares de sangue periférico humano foram obtidas a partir de 4 mL de sangue de 6 voluntários que assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido com a autorização do Comitê de ética em pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE, Brasil nº 1.870.360/2016). A análise de viabilidade celular foi realizada pelo teste de anexina V-FITC e coloração com iodeto de propídio em concentração de EAFCe de 50, 25, 12,5 e 6 μg / mL. A medição dos níveis de citocinas e quimiocinas nos sobrenadantes dos linfócitos foi realizada pelo Cytometric Beads Matrix System (CBA), análise in vitro de óxido nítrico, contagem total de linfócitos e avaliação da ativação e inibição de linfócitos também para o perfil imunológico. Resultados: O EAFCe apresentou 3’,4’-OH flavonóide, fenilpropanoglicosídeos, saponinas, proantocianidinas poliméricas e taninos hidrolisáveis em sua composição, além de dezoito compostos desconhecidos quando comparados aos padrões disponíveis. O EAFCe apresentou atividade antimicrobiana principalmente para a bactéria Gram-positiva S. aureus. A EAFCe não promoveu morte celular em 95% dos linfócitos humanos. IL-2, IL-10, TNF-α, citocinas de IFN-γ e óxido nítrico foram produzidos pelos linfócitos e o subconjunto de linfócitos T CD8 + foram ativados através da estimulação com EAFCe. Conclusão: EAFCe apresentou atividade antibacteriana moderada de acordo com os níveis do valor da CMI, não apresentou atividade citotóxica e mostrou atividade imunomoduladora em glóbulos brancos humanos, confirmando seu potencial uso como imunomodulador e antibacteriano, sugerindo potencial terapêutico alternativo desta planta para tratamento seguro e eficaz de feridas.
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