Caracterização do perfil de glicoproteínas presentes em soros de indivíduos sadios e pacientes com dengue clássica e hemorrágica utilizando lectina de semente de Cratylia mollis (Cramoll 1,4)
As lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica, capazes de interagir de forma reversível com carboidratos através de pelo menos um sítio de ligação, bem como aglutinar células através de dois ou mais sítios de ligação, aglutinam células vegetais e/ou animais e precipitam glico...
Main Author: | PAULA, Raiana Apolinário de |
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Other Authors: | ZINGALI, Russolina Benedeta |
Format: | masterThesis |
Language: | por |
Published: |
Universidade Federal de Pernambuco
2019
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Subjects: | |
Online Access: |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30555 |
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ir-123456789-305552019-10-26T06:32:38Z Caracterização do perfil de glicoproteínas presentes em soros de indivíduos sadios e pacientes com dengue clássica e hemorrágica utilizando lectina de semente de Cratylia mollis (Cramoll 1,4) PAULA, Raiana Apolinário de ZINGALI, Russolina Benedeta CORREIA, Maria Tereza dos Santos http://lattes.cnpq.br/4616396231713875 http://lattes.cnpq.br/2050094723109880 Dengue Lectinas Imunologia As lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica, capazes de interagir de forma reversível com carboidratos através de pelo menos um sítio de ligação, bem como aglutinar células através de dois ou mais sítios de ligação, aglutinam células vegetais e/ou animais e precipitam glicoconjugados. Essa propriedade promoveu a inserção das lectinas em diversas aplicações na área biomédica. Na atualidade, a dengue constitui um dos problemas mais graves de saúde pública, sendo mais prevalente em pessoas da região tropical. Neste trabalho foi investigada a utilização da lectina Cramoll 1,4 imobilizadas em suporte de afinidade para o isolamento de glicoproteínas de soro de indivíduos sadios (IS) e de pacientes com dengue clássica (DC) e dengue hemorrágica (DH), bem, como análises proteômica das amostras. As lectinas da semente de Cratylia mollis (Cramoll 1,4, específicas para D-glicose) foram, previamente, imobilizadas em suporte de sepharose CL-4B. Os soros IS, DC e DH foram aplicados a uma coluna de cromatografia contendo Cibacron Blue F3GA para a depleção eficaz de albumina de soro humano. Após a depleção, a fracção não adsorvida do soro foi aplicada em uma coluna contendo Cramoll 1,4-Sepharose e equilibrada com NaCl 0,15 M, em seguida a coluna foi eluída com uma solução de D-glucose bioespecífica a 0,3 M em NaCl a 0,15 M. As fracções foram recolhidas e avaliadas quanto à concentração de proteína e do perfil electroforético e análise proteômica. Foram identificadas aproximadamente 320 proteínas, sendo que 91 dessas proteínas foram comuns aos três grupos de estudo e também foram detectadas proteínas exclusivas para cada condição: 62 para IS, 31 para DC e 49 para DH. Cramoll 1,4 imobilizada mostrou-se eficiente para purificação de glicoproteínas nos diferentes soros de pacientes com dengue, apresentando um perfil de seletividade característico para os diferentes soros de IS, DC e DH. As lectinas imobilizadas podem ser consideradas como uma potencial ferramenta para o isolamento de moléculas com interesse biotecnológico. CNPq The lectins are proteins or glycoproteins non-immune origin able to interact reversibly with carbohydrates through at least one binding site, as well as clumping cells through two or more binding sites, agglutinate plant cells and/or animals and precipitate glycoconjugates. This property has promoted the insertion of the lectins in various applications in the biomedical area. Nowadays, dengue is one of the most serious public health problems, being most prevalent in people of the tropical region. In this work, we investigated the use of Cramoll 1.4 lectin immobilized in support of affinity for the isolation of serum glycoproteins of healthy individuals (HI) and patients with dengue fever (DF) and dengue hemorrhagic fever (DHF) as well as proteomics analyses of the samples. The lectins of the seed of Cratylia mollis (Cramoll 1.4, specific to D-glucose) were previously immobilized in sepharose CL-4B support. Serum of IS, DC and DH have been applied to a column chromatography of Cibacron Blue F3GA for the effective depletion of human serum albumin. After depletion, not adsorbed serum fraction was applied to a column containing Cramoll 1.4 -Sepharose and balanced with 0.15 M NaCl, and then the column was eluted with a solution of D-glucose to 0.3 M in 0.15 M NaCl. The fractions were collected and evaluated for protein concentration, electrophoretic profile and proteomic analysis. Approximately 320 proteins were identified, being that 91 of these proteins were common to the three study groups and also were detected unique proteins for each condition: 62 to HI, 31 for DF and 49 for DHF. Cramoll 1.4 immobilized proved efficient for purification of glycoproteins in different serum from patients with dengue, showing a characteristic selectivity for different sera from HI, DF and DHF. The immobilized lectins can be considered as a potential tool for the isolation of molecules with biotechnological interest. 2019-05-08T21:46:28Z 2019-05-08T21:46:28Z 2013-02-26 masterThesis https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30555 por embargoedAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ application/pdf Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Bioquimica e Fisiologia |
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Dengue Lectinas Imunologia |
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As lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica, capazes de interagir de forma reversível com carboidratos através de pelo menos um sítio de ligação, bem como aglutinar células através de dois ou mais sítios de ligação, aglutinam células vegetais e/ou animais e precipitam glicoconjugados. Essa propriedade promoveu a inserção das lectinas em diversas aplicações na área biomédica. Na atualidade, a dengue constitui um dos problemas mais graves de saúde pública, sendo mais prevalente em pessoas da região tropical. Neste trabalho foi investigada a utilização da lectina Cramoll 1,4 imobilizadas em suporte de afinidade para o isolamento de glicoproteínas de soro de indivíduos sadios (IS) e de pacientes com dengue clássica (DC) e dengue hemorrágica (DH), bem, como análises proteômica das amostras. As lectinas da semente de Cratylia mollis (Cramoll 1,4, específicas para D-glicose) foram, previamente, imobilizadas em suporte de sepharose CL-4B. Os soros IS, DC e DH foram aplicados a uma coluna de cromatografia contendo Cibacron Blue F3GA para a depleção eficaz de albumina de soro humano. Após a depleção, a fracção não adsorvida do soro foi aplicada em uma coluna contendo Cramoll 1,4-Sepharose e equilibrada com NaCl 0,15 M, em seguida a coluna foi eluída com uma solução de D-glucose bioespecífica a 0,3 M em NaCl a 0,15 M. As fracções foram recolhidas e avaliadas quanto à concentração de proteína e do perfil electroforético e análise proteômica. Foram identificadas aproximadamente 320 proteínas, sendo que 91 dessas proteínas foram comuns aos três grupos de estudo e também foram detectadas proteínas exclusivas para cada condição: 62 para IS, 31 para DC e 49 para DH. Cramoll 1,4 imobilizada mostrou-se eficiente para purificação de glicoproteínas nos diferentes soros de pacientes com dengue, apresentando um perfil de seletividade característico para os diferentes soros de IS, DC e DH. As lectinas imobilizadas podem ser consideradas como uma potencial ferramenta para o isolamento de moléculas com interesse biotecnológico. |
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