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Identificação de parceiros funcionais e propriedades do fator EIF4E5, homólogo do fator de iniciação da tradução EIF4E (EIF4E5) de Leishmania infantum

Na tradução em eucariotos, a etapa de iniciação requer a cooperação de fatores proteicos que auxiliam as subunidades ribossomais na sua função. Dentre esses, destaca-se o complexo eIF4F, onde a subunidade eIF4E é a responsável pelo reconhecimento dos mRNAs por meio de sua extremidade 5 Nos tripanos...

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Main Author: CAVALCANTI, Thaíse Yasmine Vasconcelos de Lima
Other Authors: MELO NETO, Osvaldo Pompílio de
Format: masterThesis
Language: por
Published: Universidade Federal de Pernambuco 2019
Subjects:
Lieshmania
Expressão gênica
Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/32714
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id ir-123456789-32714
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spelling ir-123456789-327142019-09-13T05:07:35Z Identificação de parceiros funcionais e propriedades do fator EIF4E5, homólogo do fator de iniciação da tradução EIF4E (EIF4E5) de Leishmania infantum CAVALCANTI, Thaíse Yasmine Vasconcelos de Lima MELO NETO, Osvaldo Pompílio de MALVEZZI, Amaranta Muniz http://lattes.cnpq.br/2972881329932560 http://lattes.cnpq.br/6769466465877287 Lieshmania Expressão gênica Na tradução em eucariotos, a etapa de iniciação requer a cooperação de fatores proteicos que auxiliam as subunidades ribossomais na sua função. Dentre esses, destaca-se o complexo eIF4F, onde a subunidade eIF4E é a responsável pelo reconhecimento dos mRNAs por meio de sua extremidade 5 Nos tripanossomatídeos, protozoários parasitas de importância médica, sua expressão gênica é regulada pós-transcricionalmente e durante a tradução. Nesse contexto, múltiplos homólogos de eIF4E foram identificados nestes organismos com possível função na regulação da tradução. Dentre esses, os EIF4E5 e EIF4E6 ainda não foram descritos formalmente em Leishmania e o estudo do EIF4E5 foi o objetivo deste trabalho. Para isso, construções plasmidiais foram inicialmente geradas para a expressão da proteína nativa e mutantes em Leishmania infantum. Foi visto que a superexpressão do EIF4E5 se dá em diferentes fases de crescimento da L. infantum. Sua distribuição subcelular, determinada por imunofluorescência, ocorre por todo o citoplasma e sua superexpressão leva a alterações morfológicas no parasita. Ensaios de imunoprecipitação e espectrometria de massas revelaram que o EIF4E5 interage especificadamente com o EIF4G1, homólogo de outra subunidade do complexo eIF4F, o eIF4G. Outras interações com proteínas de modificação de mRNAs e ligadas a vias de sinalização também foram identificadas, mas várias destas interações foram abolidas quando foi mutado um resíduo de triptofano conservado no EIF4E5. Sendo assim, este trabalho revelou aspectos inéditos relacionados à função desta proteína nos tripanossomatídeos. CAPES In translation in eukaryotes, the initiation stage requires the cooperation of proteins factors that assist the ribosomes subunits in its function. Amongst these the eIF4F complex stands out, with its subunit eIF4E responsible for the recognition of mRNAs though their 5„ end. In trypanosomatids, protozoan parasites of medical importance, their gene expression is regulated post- transcriptionally and also during translation. In this context, multiple eIF4E homologues have been identified in these organisms with possible functions in the regulation of translation. Amongst these, the EIF4E5 and EIF4E6 homologues have not yet been formally described in Leishmania. Therefore, the study of EIF4E5 was the objective of this work. Initially plasmid constructions were generated for the expression of the native and mutant protein in Leishmania infantum. The overexpression of EIF4E5 was confirmed and seen to occurs at different stages of growth of L. infantum. Its subcellular distribution was determined by immunofluorescence and seen to occur throughout the cytoplasm but its overexpression leads to morphological changes in the parasite. Immunoprecipitation and mass spectrometry assays revealed that EIF4E5 interacts specifically with EIF4G1, homologous to another eIF4F subunit, eIF4G. Other interactions with mRNA modifying enzymes and proteins linked to signaling pathways were also identified. Several of these interactions were abolished when a tryptophan residue conserved in EIF4E5 was mutated. Thus, this work revealed unknown aspects related to the function of this protein in trypanosomatids. 2019-09-12T19:00:19Z 2019-09-12T19:00:19Z 2018-03-02 masterThesis https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/32714 por openAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Genetica
institution REPOSITORIO UFPE
collection REPOSITORIO UFPE
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topic Lieshmania
Expressão gênica
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Expressão gênica
CAVALCANTI, Thaíse Yasmine Vasconcelos de Lima
Identificação de parceiros funcionais e propriedades do fator EIF4E5, homólogo do fator de iniciação da tradução EIF4E (EIF4E5) de Leishmania infantum
description Na tradução em eucariotos, a etapa de iniciação requer a cooperação de fatores proteicos que auxiliam as subunidades ribossomais na sua função. Dentre esses, destaca-se o complexo eIF4F, onde a subunidade eIF4E é a responsável pelo reconhecimento dos mRNAs por meio de sua extremidade 5 Nos tripanossomatídeos, protozoários parasitas de importância médica, sua expressão gênica é regulada pós-transcricionalmente e durante a tradução. Nesse contexto, múltiplos homólogos de eIF4E foram identificados nestes organismos com possível função na regulação da tradução. Dentre esses, os EIF4E5 e EIF4E6 ainda não foram descritos formalmente em Leishmania e o estudo do EIF4E5 foi o objetivo deste trabalho. Para isso, construções plasmidiais foram inicialmente geradas para a expressão da proteína nativa e mutantes em Leishmania infantum. Foi visto que a superexpressão do EIF4E5 se dá em diferentes fases de crescimento da L. infantum. Sua distribuição subcelular, determinada por imunofluorescência, ocorre por todo o citoplasma e sua superexpressão leva a alterações morfológicas no parasita. Ensaios de imunoprecipitação e espectrometria de massas revelaram que o EIF4E5 interage especificadamente com o EIF4G1, homólogo de outra subunidade do complexo eIF4F, o eIF4G. Outras interações com proteínas de modificação de mRNAs e ligadas a vias de sinalização também foram identificadas, mas várias destas interações foram abolidas quando foi mutado um resíduo de triptofano conservado no EIF4E5. Sendo assim, este trabalho revelou aspectos inéditos relacionados à função desta proteína nos tripanossomatídeos.
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