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Padronização e avaliação da Nested PCR em tubo único (STNPCR) para detecção de Circovírus suíno 2 no fluido oral de suínos

O Circovírus suíno 2 (PCV2) é um agente que possui um papel importante nas perdas econômicas em granjas de suínos através da morte e queda no desempenho desses animais. A literatura cita o desenvolvimento e aplicação com êxito da Nested PCR em tubo único (STNPCR) para diagnóstico de patógenos humano...

Full description

Main Author: ARAÚJO, Danielle Guimarães
Other Authors: FREITAS, Antonio Carlos de
Format: masterThesis
Language: por
Published: Universidade Federal de Pernambuco 2019
Subjects:
Suínos – Doenças
Viroses
Suinocultura
Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/34439
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id ir-123456789-34439
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spelling ir-123456789-344392019-10-11T05:12:06Z Padronização e avaliação da Nested PCR em tubo único (STNPCR) para detecção de Circovírus suíno 2 no fluido oral de suínos ARAÚJO, Danielle Guimarães FREITAS, Antonio Carlos de BARBOSA, Clara Nilce http://lattes.cnpq.br/7659662260138313 http://lattes.cnpq.br/3473903684822728 http://lattes.cnpq.br/9178172410439299 Suínos – Doenças Viroses Suinocultura O Circovírus suíno 2 (PCV2) é um agente que possui um papel importante nas perdas econômicas em granjas de suínos através da morte e queda no desempenho desses animais. A literatura cita o desenvolvimento e aplicação com êxito da Nested PCR em tubo único (STNPCR) para diagnóstico de patógenos humanos e animais, sendo a padronização desta técnica para a identificação da presença do PCV2, de grande importância para suinocultura da região. Desta forma, este trabalho teve como objetivo padronizar e avaliar a STNPCR para detectar o Circovírus Suíno 2 a partir de amostras de fluido oral de suínos. Para isto, foram coletadas 55 amostras de fluido oral de suínos clinicamente saudáveis. O DNA foi extraído e quantificado para realização da PCR convencional e STNCR. Para garantir a segurança e confiabilidade dos resultados, uma PCR direcionada para o gene da β-actina suína foi realizada em todas as amostras. Foram avaliadas diferentes temperaturas, concentrações de primers e número de ciclos. Todos os fragmentos amplificados foram analisados através de eletroforese. Através dos testes para otimização das técnicas, foi possível detectar o produto esperado em ambas as reações, sendo um fragmento de 478pb na PCR direcionada ao gene da β-actina, e um fragmento de 225pb na STNPCR para detecção do PCV2. A padronização da técnica de STNPCR é uma ferramenta útil para a identificação da presença do PCV2, que pode contribuir na redução do impacto econômico que este problema representa para a suinocultura industrial. CAPES Porcine Circovirus 2 (PCV2) is an agent that plays an important role in economic losses in pig farms through the death and decrease in the performance of these animals. The literature cites the successful development and application of Single tube Nested PCR (STNPCR) for the diagnosis of human and animal pathogens, being the standardization of this technique to identify the presence of PCV2, of great importance for swine breeding in the region. Thus, this work aimed to standardize and evaluate the STNPCR to detect Porcine Circovirus 2 from swine oral fluid samples. For this, 55 samples of oral fluid from clinically healthy pigs were collected. DNA was extracted and quantified for the performance of standard PCR and STNCR. To ensure the safety and reliability of the results, a PCR targeted to the β-actin gene was performed on all samples. Different temperatures, primer concentrations and number of cycles were evaluated. All amplified fragments were analyzed by electrophoresis. Through the tests to optimize the techniques, it was possible to detect the expected product in both reactions, being a 478bp fragment in the PCR directed to the swine β-actin gene, and a fragment of 225bp in the STNPCR for the detection of PCV2. A standardization of the STNPCR technique is a useful tool to identify the presence of PCV2, which may contribute to reducing the economic impact of this problem for a Swine Breeding industry. 2019-10-10T19:24:11Z 2019-10-10T19:24:11Z 2018-10-31 masterThesis https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/34439 por openAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ application/pdf Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Inovacao Terapeutica
institution REPOSITORIO UFPE
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ARAÚJO, Danielle Guimarães
Padronização e avaliação da Nested PCR em tubo único (STNPCR) para detecção de Circovírus suíno 2 no fluido oral de suínos
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