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Detecção de genes de resistência e virulência em isolados de Klebsiella pneumoniae obtidos em hospitais da rede pública e privada de Maceió – AL

Klebsiella pneumoniae está entre as espécies bacterianas mais isoladas de amostras clínicas no mundo e no Brasil. Seus fatores de virulência associados a mecanismos de resistência a antimicrobianos ocasionam dificuldades de tratamento das infecções e um aumento nas taxas de mortalidade. Assim, este...

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Main Author: MAGALHÃES, Flávia Machulis
Other Authors: ALVES, Luiz Carlos
Format: masterThesis
Language: por
Published: Universidade Federal de Pernambuco 2020
Subjects:
Klebsiella pneumoniae
Antimicrobianos
Virulência
Online Access: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/38366
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id ir-123456789-38366
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spelling ir-123456789-383662020-10-20T05:15:16Z Detecção de genes de resistência e virulência em isolados de Klebsiella pneumoniae obtidos em hospitais da rede pública e privada de Maceió – AL MAGALHÃES, Flávia Machulis ALVES, Luiz Carlos FEITOSA, Ana Paula Sampaio http://lattes.cnpq.br/5153787943223395 http://lattes.cnpq.br/4951638470777523 http://lattes.cnpq.br/7741235050382403 Klebsiella pneumoniae Antimicrobianos Virulência Klebsiella pneumoniae está entre as espécies bacterianas mais isoladas de amostras clínicas no mundo e no Brasil. Seus fatores de virulência associados a mecanismos de resistência a antimicrobianos ocasionam dificuldades de tratamento das infecções e um aumento nas taxas de mortalidade. Assim, este estudo propôs investigar a ocorrência de genes de resistência e virulência em isolados de K. pneumoniae obtidos em hospitais das redes pública e privada de Maceió – AL, durante julho a dezembro/2018. A confirmação da espécie foi obtida por MALDI-TOF e o DNA extraído por método formol–clorofórmio. O perfil de resistência foi obtido por disco difusão e/ou por microdiluição em caldo. A presença dos genes de resistência a antimicrobianos e virulência foi verificada por PCR seguida de sequenciamento dos amplicons. Para detecção do fenótipo e hipermucoviscosidade, foi empregado o teste do fio mucoviscoso. Foram obtidos 40 isolados, dentre os quais a taxa de resistência a carbapenêmicos, aminoglicosídeos e polimixinas foi de 37,5%, 62,5% e 17,5%, respectivamente. A prevalência do gene blaKPC foi alta (97,6%) e foram encontrados os genes blaNDM em 63,4% e o blaIMP-1 em 9,8% dos isolados. Os genes rmtD e mcr-1 foram detectados em 67,5% e em 32,5% dos isolados, respectivamente. Foram avaliadas duas mutações no gene pmrB, as quais não demonstraram influência sobre a resistência a polimixina, enquanto duas mutações no gene mrgB potencialmente ocasionaram a desativação do gene e, consequentemente, diminuição da suscetibilidade à polimixina. Todos isolados apresentaram os genes cpsP e mrkA, em contrapartida, os genes mrkD, ecpA, iutA e ybtS foram encontrados em 51,2%, 53,7%, 85,4% e 41,5%, respectivamente. Foram identificados dois isolados apresentando o fenótipo de hipermucoviscosidade, ao qual não foi associado o perfil e hipervirulência. O presente estudo abrange a epidemiologia molecular em isolados MDR de K. pneumoniae de Alagoas, sendo pioneiro na região. Foi encontrada uma alta coexistência entre os genes de resistência. Os dados fornecidos geram subsídios teóricos para o estabelecimento de medidas de controle adequadas a dispersão e disseminação de genes de resistência. CAPES CNPq FACEPE FIOCRUZ Klebsiella pneumoniae is among the most isolated bacterial species from clinical samples in the world and in Brazil. Its virulence factors associated with mechanisms of resistance to antimicrobials cause difficulties in treating infections and an increase in mortality rates. Thus, this study proposed to investigate the occurrence of resistance and virulence genes in Klebsiella pneumoniae isolates obtained in public and private hospitals in Maceió - AL, during July to December, 2018. Confirmation of the species was obtained by MALDI-TOF and the DNA extracted by the formaldehyde – chloroform method. The profile of resistance to antimicrobials was obtained by diffusion disc and/or microdilution in broth. The presence of the resistance and virulence genes was verified by PCR followed by sequencing of the amplicons. To detect the hypermucoviscosity phenotype, the string test was performed. Forty isolates were obtained, which the resistance rate to carbapenems, aminoglycosides and polymyxins was 37.5%, 62.5% and 17.5%, respectively. The prevalence of the blaKPC gene was worrying (97.6%), whilst the blaNDM gene were found in 63.4% and blaIMP in 9.8% of the isolates. The rmtD and mcr-1 genes were detected in 67.5% and 32.5% of the isolates, respectively. Two mutations in the pmrB gene were evaluated, which showed no influence on polymyxin resistance, while two mutations in the mrgB gene probably caused the deactivation of the gene and, consequently, decreased isolate’s susceptibility to polymyxin. All isolates presented cpsP and mrkA genes, and the mrkD, ecpA, iutA and ybtS genes were found in 51.2%, 53.7%, 85.4% and 41.5% of the isolates, respectively. Two isolates were identified presenting the hypermucoviscosity phenotype, to which the hypervirulence profile were not associated. The present study covers molecular epidemiology in MDR isolates from K. pneumoniae from Alagoas, being a pioneer in the region. A high coexistence between resistance genes has been found. The data provided generate theoretical support for the establishment of adequate control measures for the dispersion and dissemination of resistance genes. 2020-10-19T19:17:31Z 2020-10-19T19:17:31Z 2020-02-19 masterThesis MAGALHÃES, Flávia Machulis. Detecção de genes de resistência e virulência em isolados de Klebsiella pneumoniae obtidos em hospitais da rede pública e privada de Maceió – AL. 2020. Dissertação (Mestrado em Biologia Aplicada à Saúde) - Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2020. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/38366 por embargoedAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ application/pdf Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a Saude
institution REPOSITORIO UFPE
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MAGALHÃES, Flávia Machulis
Detecção de genes de resistência e virulência em isolados de Klebsiella pneumoniae obtidos em hospitais da rede pública e privada de Maceió – AL
description Klebsiella pneumoniae está entre as espécies bacterianas mais isoladas de amostras clínicas no mundo e no Brasil. Seus fatores de virulência associados a mecanismos de resistência a antimicrobianos ocasionam dificuldades de tratamento das infecções e um aumento nas taxas de mortalidade. Assim, este estudo propôs investigar a ocorrência de genes de resistência e virulência em isolados de K. pneumoniae obtidos em hospitais das redes pública e privada de Maceió – AL, durante julho a dezembro/2018. A confirmação da espécie foi obtida por MALDI-TOF e o DNA extraído por método formol–clorofórmio. O perfil de resistência foi obtido por disco difusão e/ou por microdiluição em caldo. A presença dos genes de resistência a antimicrobianos e virulência foi verificada por PCR seguida de sequenciamento dos amplicons. Para detecção do fenótipo e hipermucoviscosidade, foi empregado o teste do fio mucoviscoso. Foram obtidos 40 isolados, dentre os quais a taxa de resistência a carbapenêmicos, aminoglicosídeos e polimixinas foi de 37,5%, 62,5% e 17,5%, respectivamente. A prevalência do gene blaKPC foi alta (97,6%) e foram encontrados os genes blaNDM em 63,4% e o blaIMP-1 em 9,8% dos isolados. Os genes rmtD e mcr-1 foram detectados em 67,5% e em 32,5% dos isolados, respectivamente. Foram avaliadas duas mutações no gene pmrB, as quais não demonstraram influência sobre a resistência a polimixina, enquanto duas mutações no gene mrgB potencialmente ocasionaram a desativação do gene e, consequentemente, diminuição da suscetibilidade à polimixina. Todos isolados apresentaram os genes cpsP e mrkA, em contrapartida, os genes mrkD, ecpA, iutA e ybtS foram encontrados em 51,2%, 53,7%, 85,4% e 41,5%, respectivamente. Foram identificados dois isolados apresentando o fenótipo de hipermucoviscosidade, ao qual não foi associado o perfil e hipervirulência. O presente estudo abrange a epidemiologia molecular em isolados MDR de K. pneumoniae de Alagoas, sendo pioneiro na região. Foi encontrada uma alta coexistência entre os genes de resistência. Os dados fornecidos geram subsídios teóricos para o estabelecimento de medidas de controle adequadas a dispersão e disseminação de genes de resistência.
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