Desenvolvimento de estratégia vacinal contra o Zika Vírus utilizando a levedura Pichia Pastoris como carreadora de antígenos
Leveduras, como Pichia pastoris, vêm sendo exploradas não apenas para produção de proteínas recombinantes, mas também como carreadoras de antígenos em estratégias vacinais. O desenvolvimento de vacinas para o vírus da Zika é importante para a saúde pública, devido às manifestações clínicas neurológi...
| Main Author: | SILVA, Anna Jéssica Duarte |
|---|---|
| Other Authors: | FREITAS, Antonio Carlos de |
| Format: | doctoralThesis |
| Language: | por |
| Published: |
Universidade Federal de Pernambuco
2020
|
| Subjects: | |
| Online Access: |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/38482 |
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ir-123456789-38482 |
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ir-123456789-384822020-11-05T05:16:40Z Desenvolvimento de estratégia vacinal contra o Zika Vírus utilizando a levedura Pichia Pastoris como carreadora de antígenos SILVA, Anna Jéssica Duarte FREITAS, Antonio Carlos de JESUS, André Luiz Santos de MELO, Cristiane Moutinho Lagos de http://lattes.cnpq.br/0944125118455032 http://lattes.cnpq.br/3473903684822728 http://lattes.cnpq.br/8904588007184815 http://lattes.cnpq.br/5372943772583670 Arboviroses Infecção pelo Zika Vírus Vacinas Leveduras Leveduras, como Pichia pastoris, vêm sendo exploradas não apenas para produção de proteínas recombinantes, mas também como carreadoras de antígenos em estratégias vacinais. O desenvolvimento de vacinas para o vírus da Zika é importante para a saúde pública, devido às manifestações clínicas neurológicas que podem ser desencadeadas pela infecção. O presente trabalho visou a produção de proteínas do ZIKV em P. pastoris e a avaliação imunológica frente às leveduras recombinantes dispondo os antígenos em sua superfície. Os cassetes de expressão foram compostos por epítopos das proteínas Envelope e NS1, preditos in silico quanto a capacidade de ligação a células B, e a MHC classes I e II. Os genes foram fusionados ao gene da proteína âncora α-Aglutinina, clonados em vetor de expressão e utilizados para transformar P. pastoris. Western blot e imunofluorescência foram empregados para confirmar a produção e a ancoragem das proteínas recombinantes. A resposta imune promovida pelas leveduras foi avaliada, in vitro e in vivo (em modelo murino). A dosagem de citocinas indicou um perfil de respota tipo Th1, similar ao induzido pelo vírus. P. pastoris expressando os epítopos EnvNS1 se destacou frente as outras construções compostas pelos conjuntos de epítopos de cada proteína, individualmente. EnvNS1 apresenta uma seleção de epítopos arranjados de forma inédita, e se mostra um candidato vacinal promissor diante do seu potencial imunogênico, em relação a ativação de linfócitos T CD4+ e CD8+, e às citocinas induzidas. CAPES Yeasts, such as Pichia pastoris, have been explored not only for the production of recombinant proteins, but also as carriers of antigens in vaccine strategies. The development of vaccines for the Zika virus is important for public health, due to the neurological clinical manifestations that can be triggered by the infection. The present work aimed at the production of ZIKV proteins in P. pastoris and the immunological evaluation of recombinant yeasts displaying the antigens on their surface. The expression cassettes were composed of epitopes of the Envelope and NS1 proteins, in silico predicted in terms of their capacity to bind to B cells, and to MHC classes I and II. The genes were fused to the anchor protein α-Aglutinin gene, cloned into an expression vector and used to transform P. pastoris. Western blot and immunofluorescence were used to confirm the production and anchorage of the recombinant proteins. The immune response promoted by yeasts was evaluated, in vitro and in vivo (in murine model). The cytokine dosage indicated a Th1-type response profile, similar to that induced by the virus. P. pastoris expressing the EnvNS1 epitopes stood out compared to the other constructions composed of the sets of epitopes of each protein, individually. EnvNS1 presents a set of epitopes arranged in an inedited way, and shows an promising vaccine candidate in view of its immunogenic potential, in relation to the activation of CD4 + and CD8 + T lymphocytes and induced cytokines. 2020-11-04T13:35:36Z 2020-11-04T13:35:36Z 2020-02-18 doctoralThesis SILVA, Anna Jéssica Duarte. Desenvolvimento de estratégia vacinal contra o Zika Vírus utilizando a levedura Pichia Pastoris como carreadora de antígenos. 2020. Tese (Doutorado em Genética) - Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2020. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/38482 por openAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ application/pdf Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Genetica |
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REPOSITORIO UFPE |
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Arboviroses Infecção pelo Zika Vírus Vacinas Leveduras |
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Arboviroses Infecção pelo Zika Vírus Vacinas Leveduras SILVA, Anna Jéssica Duarte Desenvolvimento de estratégia vacinal contra o Zika Vírus utilizando a levedura Pichia Pastoris como carreadora de antígenos |
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Leveduras, como Pichia pastoris, vêm sendo exploradas não apenas para produção de proteínas recombinantes, mas também como carreadoras de antígenos em estratégias vacinais. O desenvolvimento de vacinas para o vírus da Zika é importante para a saúde pública, devido às manifestações clínicas neurológicas que podem ser desencadeadas pela infecção. O presente trabalho visou a produção de proteínas do ZIKV em P. pastoris e a avaliação imunológica frente às leveduras recombinantes dispondo os antígenos em sua superfície. Os cassetes de expressão foram compostos por epítopos das proteínas Envelope e NS1, preditos in silico quanto a capacidade de ligação a células B, e a MHC classes I e II. Os genes foram fusionados ao gene da proteína âncora α-Aglutinina, clonados em vetor de expressão e utilizados para transformar P. pastoris. Western blot e imunofluorescência foram empregados para confirmar a produção e a ancoragem das proteínas recombinantes. A resposta imune promovida pelas leveduras foi avaliada, in vitro e in vivo (em modelo murino). A dosagem de citocinas indicou um perfil de respota tipo Th1, similar ao induzido pelo vírus. P. pastoris expressando os epítopos EnvNS1 se destacou frente as outras construções compostas pelos conjuntos de epítopos de cada proteína, individualmente. EnvNS1 apresenta uma seleção de epítopos arranjados de forma inédita, e se mostra um candidato vacinal promissor diante do seu potencial imunogênico, em relação a ativação de linfócitos T CD4+ e CD8+, e às citocinas induzidas. |
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