Produção de lipases por culturas de Trichosporon da Micoteca URM: seleção, produção, purificação e aplicação enzimática
Trichosporon são leveduras pertencentes ao filo Basidiomycota, que se destacam na produção de lipases, dentre outras enzimas. Os objetivos deste estudo foram Selecionar, culturas de Trichosporon mantidas na Micoteca URM, quanto à produção de lipases, através de avaliação qualitativa e quantitativa,...
Main Author: | SOUZA, Odacy Camilo de |
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Other Authors: | MOTTA, Cristina Maria de Souza |
Format: | doctoralThesis |
Language: | por |
Published: |
Universidade Federal de Pernambuco
2018
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Subjects: | |
Online Access: |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26600 |
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Summary: |
Trichosporon são leveduras pertencentes ao filo Basidiomycota, que se destacam na produção de lipases, dentre outras enzimas. Os objetivos deste estudo foram Selecionar, culturas de Trichosporon mantidas na Micoteca URM, quanto à produção de lipases, através de avaliação qualitativa e quantitativa, otimizar a produção da enzima, caracterizar, pré-purificar e aplicar avaliando a capacidade de degradar efluentes de abatedouros de bovinos. Foram realizadas a reativação e autenticação das culturas através das características morfofisiológicas. Para degradação do meio rico em lipídeos, foram retirados fragmentos das culturas mantidas em SYE contidos em tubo de ensaio e transferidos para o centro da placa de Petri contendo o mesmo meio. Após sete dias de crescimento, fragmentos da cultura foram transferidos para o centro da placa de Petri com meio de cultura. As culturas foram incubadas a 28ºC e 37ºC, observadas durante 24, 48, 72 e 96 horas, para evidenciar a presença de halo opaco ao redor da colônia. Para determinação da capacidade lipolítica em fermentação submersa O experimento foi realizado utilizando Erlenmeyers de 250 mL contendo 50mL dos seguintes meios; I composto por 1% (v/v) de óleo de oliva, meio II contendo 1% (v/v) de óleo de mamona, e meio III composto por 1% (v/v) de óleo de licuri, adicionados de 0,5% (p/v) extrato de levedura e pH ajustado para 6,5. Esterilizados e inoculados e incubados a 160 rpm a 37ºC por 96 horas. Foi utilizado o método espectrofotométrico para determinar a atividade da lipase. Otimização do meio de produção de lipases por estatística de aproximação, o meio foi preparado utilizando diferentes concentrações de nutrientes testados de acordo com os experimentos do planejamento estatístico. Os inóculos foram adicionados a cada 50 mL de meio em Erlenmeyer de 250 mL de acordo com a concepção da matriz. Os frascos foram incubados por até cinco dias em diferentes temperaturas, sob agitação em diferentes rotações. Identificação e seleção das variáveis significativas para a produção de lipases foi realizada com base no design PB. Foram testados 11 variáveis. Para a Metodologia de superfície de resposta foram usadas as variáveis selecionadas para maior produção de lipase. Para caracterização enzimática foi avaliado o efeito e a estabilidade do pH, temperatura, íons, solventes e detergentes sobre a atividade enzimática. Na purificação foi utilizado o sistema de duas fases aquosas, com planejamento estatístico 2³, assim como a aplicação do estrato bruto. Em meio sólido, todas as culturas apresentaram crescimento, sem presença de halo de degradação, em cultivo submerso, todas as culturas apresentaram atividade. Trichosporon sporotrichoides URM 6630, produziu 104,07 UmL. O melhor pH e temperatura para produção da enzima foram pH 10.0 e 40 ˚C. A purificação teve coeficiente de partição 76 e recuperação da atividade 164,71%, e o fator de purificação de 0,96. Para a aplicação a melhor de taxa de degradação foi obtida com a menor concentração do extrato bruto. Primeiro relato de produção de lipases por essa espécie, e da utilização de óleo de licuri como substrato. Este micro-organismo torna-se bastante promissor para a produção de lipases produz altos níveis destas enzimas, em condições que minimizando os custos da produção. |
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