Staff View: Produção de lipases por culturas de Trichosporon da Micoteca URM: seleção, produção, purificação e aplicação enzimática

Produção de lipases por culturas de Trichosporon da Micoteca URM: seleção, produção, purificação e aplicação enzimática

Trichosporon são leveduras pertencentes ao filo Basidiomycota, que se destacam na produção de lipases, dentre outras enzimas. Os objetivos deste estudo foram Selecionar, culturas de Trichosporon mantidas na Micoteca URM, quanto à produção de lipases, através de avaliação qualitativa e quantitativa,...

Full description

Main Author:	SOUZA, Odacy Camilo de
Other Authors:	MOTTA, Cristina Maria de Souza
Format:	doctoralThesis
Language:	por
Published:	Universidade Federal de Pernambuco 2018
Subjects:	Basidiomycota Lipase Biotecnologia
Online Access:	https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26600
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spelling	ir-123456789-266002019-10-26T05:49:36Z Produção de lipases por culturas de Trichosporon da Micoteca URM: seleção, produção, purificação e aplicação enzimática SOUZA, Odacy Camilo de MOTTA, Cristina Maria de Souza MOREIRA, Keila Aparecida http://lattes.cnpq.br/2106071730664524 http://lattes.cnpq.br/0573658625006450 Basidiomycota Lipase Biotecnologia Trichosporon são leveduras pertencentes ao filo Basidiomycota, que se destacam na produção de lipases, dentre outras enzimas. Os objetivos deste estudo foram Selecionar, culturas de Trichosporon mantidas na Micoteca URM, quanto à produção de lipases, através de avaliação qualitativa e quantitativa, otimizar a produção da enzima, caracterizar, pré-purificar e aplicar avaliando a capacidade de degradar efluentes de abatedouros de bovinos. Foram realizadas a reativação e autenticação das culturas através das características morfofisiológicas. Para degradação do meio rico em lipídeos, foram retirados fragmentos das culturas mantidas em SYE contidos em tubo de ensaio e transferidos para o centro da placa de Petri contendo o mesmo meio. Após sete dias de crescimento, fragmentos da cultura foram transferidos para o centro da placa de Petri com meio de cultura. As culturas foram incubadas a 28ºC e 37ºC, observadas durante 24, 48, 72 e 96 horas, para evidenciar a presença de halo opaco ao redor da colônia. Para determinação da capacidade lipolítica em fermentação submersa O experimento foi realizado utilizando Erlenmeyers de 250 mL contendo 50mL dos seguintes meios; I composto por 1% (v/v) de óleo de oliva, meio II contendo 1% (v/v) de óleo de mamona, e meio III composto por 1% (v/v) de óleo de licuri, adicionados de 0,5% (p/v) extrato de levedura e pH ajustado para 6,5. Esterilizados e inoculados e incubados a 160 rpm a 37ºC por 96 horas. Foi utilizado o método espectrofotométrico para determinar a atividade da lipase. Otimização do meio de produção de lipases por estatística de aproximação, o meio foi preparado utilizando diferentes concentrações de nutrientes testados de acordo com os experimentos do planejamento estatístico. Os inóculos foram adicionados a cada 50 mL de meio em Erlenmeyer de 250 mL de acordo com a concepção da matriz. Os frascos foram incubados por até cinco dias em diferentes temperaturas, sob agitação em diferentes rotações. Identificação e seleção das variáveis significativas para a produção de lipases foi realizada com base no design PB. Foram testados 11 variáveis. Para a Metodologia de superfície de resposta foram usadas as variáveis selecionadas para maior produção de lipase. Para caracterização enzimática foi avaliado o efeito e a estabilidade do pH, temperatura, íons, solventes e detergentes sobre a atividade enzimática. Na purificação foi utilizado o sistema de duas fases aquosas, com planejamento estatístico 2³, assim como a aplicação do estrato bruto. Em meio sólido, todas as culturas apresentaram crescimento, sem presença de halo de degradação, em cultivo submerso, todas as culturas apresentaram atividade. Trichosporon sporotrichoides URM 6630, produziu 104,07 UmL. O melhor pH e temperatura para produção da enzima foram pH 10.0 e 40 ˚C. A purificação teve coeficiente de partição 76 e recuperação da atividade 164,71%, e o fator de purificação de 0,96. Para a aplicação a melhor de taxa de degradação foi obtida com a menor concentração do extrato bruto. Primeiro relato de produção de lipases por essa espécie, e da utilização de óleo de licuri como substrato. Este micro-organismo torna-se bastante promissor para a produção de lipases produz altos níveis destas enzimas, em condições que minimizando os custos da produção. CAPES Trichosporon yeasts are belonging to the phylum Basidiomycota, they are highlighted in lipase activity among other enzymes. The objectives of this study were to select, Trichosporon cultures kept in the URM Culture Collection, as lipase production, optimize production of the enzyme, characterize, purify and apply evaluating the ability to degrade cattle slaughterhouses wastewater. They were held reactivation and authentication of cultures through the morphological and physiological characteristics. Degradation of the lipase fragments were removed from cultures maintained in SYE contained in a test tube and transferred to the center of the petri dish containing said medium. After seven days of growth, the culture pieces were transferred to the center of the petri dish with culture medium. Cultures were incubated at 28 ° C and 37 ° C, observed for 24, 48, 72 and 96 hours, demonstrating an opaque halo around the colony. To determine the lipolytic capacity in submerged fermentation The experiment was conducted using 250 mL Erlenmeyer flasks containing 50ml of the following means; I consists of 1% (v / v) olive oil, medium II containing 1% (v / v) castor oil, and medium III consists of 1% (v / v) licuri oil added 0 5% (w / v) yeast extract and pH adjusted to 6.5. Sterilized and inoculated and incubated at 160 rpm at 37 ° C for 96 hours. The spectrophotometric method was used to determine the lipase activity. Optimization of lipase production medium by statistical approach, the medium was prepared using different concentrations of nutrients tested according to the statistical design of experiments. The inocula were added to each 50 ml of medium in 250 ml Erlenmeyer according to the design of the array. The flasks were incubated for five days at different temperatures under stirring at different speeds. Identification and selection of the variables significant for lipase production was based on the design PB. 11 variables were tested. For response surface methodology were used the variables selected for increased production of lipase. For enzyme characterization, the effects and stability on pH, temperature, ions, solvents and detergents on the enzymatic activity. Purification was used in the aqueous two-phase system with statistical design 2³, as well as the application of the crude stratum. In a solid medium, all cultures grew without the presence of degradation halo, in submerged cultures, all cultures showed activity. Trichosporon sporotrichoides URM 6630, produced 104.07 UML. The best pH and temperature for enzyme production were pH 10.0 and 40 ° C. Purification was 76 and partition coefficient 164.71% activity recovery, and purification factor of 0.96. To implement the best degradation rate was obtained with the lowest concentration of the crude extract. First report of lipase production by this species, and use of licuri oil as substrate. This micro-organism becomes quite promising for lipase production produces high levels of these enzymes under conditions which minimize production. 2018-09-17T18:12:14Z 2018-09-17T18:12:14Z 2015-06-30 doctoralThesis https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26600 por openAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ application/pdf Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Biologia de Fungos
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Produção de lipases por culturas de Trichosporon da Micoteca URM: seleção, produção, purificação e aplicação enzimática

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