Otimização e caracterização parcial de L-asparaginase e L-glutaminase de actnobactéria da rizosfera de Poincianela pyramidalis
Metabólitos secundários de origem microbiana são alvo de diversas pesquisas na área biotecnológica e desempenham importantes funções, principalmente na indústria farmacêutica. Actinobactérias, são micro-organimos ubíquos, que integram o grupo de bactérias gram positivas. Entre as enzimas extracelula...
| Main Author: | SILVA, Wellma de Oliveira |
|---|---|
| Other Authors: | COELHO, Luana Cassandra Breitenbach Barroso |
| Format: | masterThesis |
| Language: | por |
| Published: |
Universidade Federal de Pernambuco
2019
|
| Subjects: | |
| Online Access: |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30485 |
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ir-123456789-304852019-05-04T05:05:27Z Otimização e caracterização parcial de L-asparaginase e L-glutaminase de actnobactéria da rizosfera de Poincianela pyramidalis SILVA, Wellma de Oliveira COELHO, Luana Cassandra Breitenbach Barroso SILVA, Leonor Alves de Oliveira da http://lattes.cnpq.br/5546763118383664 http://lattes.cnpq.br/2944428818449047 Enzimas Actinobactéria Antibiótico Metabólitos secundários de origem microbiana são alvo de diversas pesquisas na área biotecnológica e desempenham importantes funções, principalmente na indústria farmacêutica. Actinobactérias, são micro-organimos ubíquos, que integram o grupo de bactérias gram positivas. Entre as enzimas extracelulares produzidas por actinobactérias, destacam-se a L-asparaginase e L-glutaminase, ambas com grande potencial antitumoral. A L-asparaginase, enzima produzida por micro-organismos, há décadas, é usada como principio ativo de medicamentos para o tratamento médico de alguns tipos de linfomas, como a leucemia linfoide aguda. A L-glutaminase, tem sido aplicadas como potencial antitumoral, intensificador de sabor, útil como biossensores e também na fabricação de produtos químicos especiais por transformações enzimáticas. O objetivo geral deste trabalho foi otimizar a produção das enzimas L-asparaginase e L- glutaminase excretadas por actinobactéria isolada da rizosfera da Poincianella pyramidalis bem como identificar morfologicamente a actinobactéria. No melhoramento de condições da produção da L-sparaginase, o melhor resultado obtido na dosagem enzimática foi no ensaio com concentração de 1,5%, pH 4,2 a 44 °C. Em relação à dosagem proteica foi detectado 0,432 μg/mL, nas condições com concentração de 1,5%, pH 7,8 a 33 °C. No que diz respeito a otimização da produção e caracterização parcialmente a enzima L-glutaminase, a melhor atividade foi constatada no ensaio com concentração de 1,5%, pH 7,0 a 44 °C. A análise da variância resultou na determinação de R² de 99,84%. O estudo dos principais efeitos e suas interações mostrou que todos os fatores testados foram significantes. Na caracterização enzimática foram obtidos o pH ótimo 8,0 e a temperatura ótima 37°C. L-glutamina e o ácido glutâmico foram tidos como excelentes substratos. A atividade enzimática foi aumentada pela adição de íons, tais como MnCl2 e MgCl2, mas foi diminuída quando outros, como ZnSO4 foram usados, demonstrando que a atividade da enzima é suscetível a alterações diante da adição de íons metálicos.A análise estatística das variáveis e a análise da variância (ANOVA) dos resultados obtidos foram avaliadas através do programa Statistica, versão 7.0 (StatSoft Co., USA). Os resultados obtidos neste trabalho, foram relevantes para a área biotecnológica, trazendo dados sobre o modelos de produção e caracterização, além de reforçar a importância de pesquisar novas fontes microbianas, tais quais actinobactérias, para a exploração de novos metabólitos secundários. CAPES Secondary metabolites of microbial origin are the subject of several researches in the biotechnology area and play important roles, mainly in the pharmaceutical industry. Actinobacteria, are ubiquitous microorganisms, which are part of the group of gram positive bacteria. Extracellular enzymes produced by actinobacteria include L- asparaginase and L-glutaminase, both of which have a high antitumor potential. L- asparaginase, the enzyme produced by microorganisms for decades, is used as an active drug for the medical treatment of some types of lymphomas, such as acute lymphoid leukemia. L-glutaminase has been applied as an antitumor potential, flavor enhancer, useful as biosensors and also in the manufacture of special chemicals by enzymatic transformations. The general objective of this work was to optimize the production of the L-asparaginase and L-glutaminase enzymes excreted by actinobacteria isolated from the rhinoceros of Poincianella pyramidalis as well as morphologically identify the actinobacteria. In the improvement of L-sparaginase production conditions, the best result obtained in the enzymatic dosage was in the 1.5% concentration test, pH 4.2 at 44 ° C. Regarding protein dosage, 0.432 μg / mL was detected, under conditions of 1.5% concentration, pH 7.8 at 33 ° C. As regards the optimization of production and partial characterization of the enzyme L-glutaminase, the best activity was observed in the assay with a concentration of 1.5%, pH 7.0 at 44 ° C. The analysis of the variance resulted in the determination of R² of 99.84%. The study of the main effects and their interactions showed that all factors tested were significant. In the enzymatic characterization, the optimum pH 8.0 and the optimum temperature were obtained 37 ° C. L-glutamine and glutamic acid were considered as excellent substrates. The enzymatic activity was increased by the addition of ions, such as MnCl2 and MgCl2, but was decreased when others, such as ZnSO4, were used, demonstrating that the activity of the enzyme is susceptible to changes due to the addition of metallic ions. the analysis of variance (ANOVA) of the obtained results was evaluated through the program Statistica, version 7.0 (StatSoft Co., USA). The results obtained in this work were relevant to the biotechnology area, bringing data about the production and characterization models, besides reinforcing the importance of researching new microbial sources, such as actinobacteria, for the exploration of new secondary metabolites. 2019-05-03T22:30:27Z 2019-05-03T22:30:27Z 2017-02-14 masterThesis https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30485 por embargoedAccess Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ Universidade Federal de Pernambuco UFPE Brasil Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas |
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REPOSITORIO UFPE |
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Enzimas Actinobactéria Antibiótico |
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Enzimas Actinobactéria Antibiótico SILVA, Wellma de Oliveira Otimização e caracterização parcial de L-asparaginase e L-glutaminase de actnobactéria da rizosfera de Poincianela pyramidalis |
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Metabólitos secundários de origem microbiana são alvo de diversas pesquisas na área biotecnológica e desempenham importantes funções, principalmente na indústria farmacêutica. Actinobactérias, são micro-organimos ubíquos, que integram o grupo de bactérias gram positivas. Entre as enzimas extracelulares produzidas por actinobactérias, destacam-se a L-asparaginase e L-glutaminase, ambas com grande potencial antitumoral. A L-asparaginase, enzima produzida por micro-organismos, há décadas, é usada como principio ativo de medicamentos para o tratamento médico de alguns tipos de linfomas, como a leucemia linfoide aguda. A L-glutaminase, tem sido aplicadas como potencial antitumoral, intensificador de sabor, útil como biossensores e também na fabricação de produtos químicos especiais por transformações enzimáticas. O objetivo geral deste trabalho foi otimizar a produção das enzimas L-asparaginase e L- glutaminase excretadas por actinobactéria isolada da rizosfera da Poincianella pyramidalis bem como identificar morfologicamente a actinobactéria. No melhoramento de condições da produção da L-sparaginase, o melhor resultado obtido na dosagem enzimática foi no ensaio com concentração de 1,5%, pH 4,2 a 44 °C. Em relação à dosagem proteica foi detectado 0,432 μg/mL, nas condições com concentração de 1,5%, pH 7,8 a 33 °C. No que diz respeito a otimização da produção e caracterização parcialmente a enzima L-glutaminase, a melhor atividade foi constatada no ensaio com concentração de 1,5%, pH 7,0 a 44 °C. A análise da variância resultou na determinação de R² de 99,84%. O estudo dos principais efeitos e suas interações mostrou que todos os fatores testados foram significantes. Na caracterização enzimática foram obtidos o pH ótimo 8,0 e a temperatura ótima 37°C. L-glutamina e o ácido glutâmico foram tidos como excelentes substratos. A atividade enzimática foi aumentada pela adição de íons, tais como MnCl2 e MgCl2, mas foi diminuída quando outros, como ZnSO4 foram usados, demonstrando que a atividade da enzima é suscetível a alterações diante da adição de íons metálicos.A análise estatística das variáveis e a análise da variância (ANOVA) dos resultados obtidos foram avaliadas através do programa Statistica, versão 7.0 (StatSoft Co., USA). Os resultados obtidos neste trabalho, foram relevantes para a área biotecnológica, trazendo dados sobre o modelos de produção e caracterização, além de reforçar a importância de pesquisar novas fontes microbianas, tais quais actinobactérias, para a exploração de novos metabólitos secundários. |
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