Avaliação e caracterização de proteínas antigênicas e de superfície de Leishmania sp. e seu papel no diagnóstico da leishmaniose e na patogenia do parasito
As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários flagelados da família Trypanosomatidae e gênero Leishmania. Essas doenças apresentam aproximadamente 2 milhões de novos casos anuais mundialmente, com o Brasil representando grande parte deste número. Métodos de diagnóstico...
| Main Author: | CASTRO NETO, Artur Leonel de |
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| Other Authors: | MELO NETO, Osvaldo Pompílio de |
| Format: | doctoralThesis |
| Language: | por |
| Published: |
Universidade Federal de Pernambuco
2019
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| Subjects: | |
| Online Access: |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30597 |
| Tags: |
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| Summary: |
As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários flagelados da família Trypanosomatidae e gênero Leishmania. Essas doenças apresentam aproximadamente 2 milhões de novos casos anuais mundialmente, com o Brasil representando grande parte deste número. Métodos de diagnóstico eficazes e o entendimento da patogênese são essenciais para um combate eficiente da Leishmaniose. Ambos dependem da identificação e caracterização de proteínas antigenicamente relevantes de Leishmania. Este estudo objetivou avaliar proteínas antigênicas previamente selecionadas quanto ao seu potencial para o diagnóstico da leishmaniose visceral provocada por Leishmania infantum e caracterizar a proteína de virulência GP63 de Leishmania sp. de um ponto de vista genético e proteico, observando similaridades e diferenças e suas implicações para o reconhecimento pelo sistema imune. Primeiramente, as proteínas recombinantes foram obtidas através de sistema de expressão em bactérias Escherichia coli, purificadas por colunas de afinidade e quantificadas pelo método de Bradford. As proteínas purificadas foram sensibilizadas em placas de ELISA e avaliadas quanto a seu reconhecimento por soros positivos de humanos e cães infectados por L. infantum, soros de outras enfermidades e soros de indivíduos sadios. A análise dos dados e testes estatísticos foi realizada pelos programas Medcalc e Prism3. A busca por novos parálogos de GP63 foi realizada através do modelo oculto de Markov e ensaios de PCR. A construção de árvores filogenéticas foi realizada a partir de alinhamentos produzidos no MAFFT, editados com o Trimal, avaliados quanto ao modelo evolutivo pelo ProTest e construídas pelo Phyml. As modelagens proteicas foram realizadas a partir de métodos de threading e a predição de epítopos foram obtidas através dos programas AAP12, Bcpred e Bepipred. Como resultados, observamos que proteínas foram identificadas com alto potencial para o diagnóstico da doença canina ou humana, e misturas das melhores proteínas tiveram melhor desempenho na detecção de ambas as formas da doença, sugerindo um teste único para o diagnóstico. Em um segundo momento passou se a investigar o principal antígeno de superfície de espécies de Leishmania, a protease gp63. Identificamos um grande número de parálogos em Leishmania e espécies relacionadas, categorizados em grupos distintos localizados nos cromossomos 10, 28 e 31. Os genes dos dois últimos grupos parecem ser mais próximos de genes encontrados em parasitas de insetos ou plantas, enquanto que os do cromossomo 10 sofreram uma expansão em número de parálogos em Leishmania e em especial em L. braziliensis. Estes foram melhor estudados e apresentaram momentos de expressão distintos, expansão independente na evolução e eventos de recombinação intragênica. Variações de sequência e regiões de predição de anticorpos foram mapeados na superfície externa das proteínas. Esses dados sugerem um papel relevante para a variação antigênica da gp63 na biologia do parasito e na patogenia da doença. |
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